海藻糖（ trehalose）是一种二糖，由两个葡萄糖分子通过AA（ 1→1）糖苷键链接而成。它是一种非还原性糖，在酵母中含量很高。可以在干燥的环境中起到保护酶、疫苗等活性物质的作用，目前在化妆品、医药等方面得到了愈来愈广泛的应用。中国科学院微生物研究所利用生物合成，从酵母中提取出高纯度的海藻糖。
传统定性分析海藻糖的方法主要是纸层析和薄层层析法。纸层析法也可作为定量分析海藻糖的方法，但其定量的准确度和重现性都无法与高效液相色谱法（ HPLC）相比。HPLC法通常用糖分析柱、氨基键合柱作固定相，以乙腈和水的混合溶剂或纯水为流动相来分析糖。糖本身在紫外区无吸收，通常使用示差折光检测器[ 1， 6]，或者通过衍生化后再进行检测。RID灵敏度较低，衍生化法操作繁琐，且不可避免地会引入误差。蒸发光散射检测器（ ELSD）作为一种新型的通用型检测器，目前正得到越来越广泛的应用。ELSD利用了流动相与被测物之间的蒸汽压相对差异，柱洗脱液进入雾化器针管，在针的末端，洗脱液和充入的气体（通常为氮气）混合形成均匀的微小液滴漂移管的作用在于使流动相挥发，蒸汽压较小的被测物颗粒经过漂移管进入光散射池在光散射池中，被测物颗粒散射光源发出的光，经检测器检测散射光，产生电信号。ELSD在检测类酯、表面活性剂等物质中发挥着较大的作用，同样可以直接对糖进行检测，且具有较高的灵敏度。本研究力图通过实验，建立起一种快速、准确、直接测定海藻糖纯度的HPLC/ ELSD法。
1实验与方法1. 1仪器与试剂HP0高效液相色谱仪（美国Hewlett Packard公司） ：配有四元梯度泵、二极管阵列检测器（ DAD）和化学工作站。另配有Alltech 500美国公司）。
海藻糖，纯度98. 5 （ Sigma公司） 海藻糖样品（中国科学院微生物研究所合成） 甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。水为二次重蒸去离子水。
流动相使用前用0. 45Lm滤膜过滤。
1. 2色谱条件公司产品，流动相：甲醇进样量： 20LL ELSD参数：漂移管温度为75℃，氮1. 3标准溶液的配制mL甲醇中配制成储备液（对应海藻糖浓度为1000 mg/ L）。使用前以甲醇稀释成适当浓度的工作溶液。
分析试验室2结果与讨论2. 1分离条件的选择由于海藻糖样品系生物合成，纯度很高。在实验中，不断改变流动相中甲醇和水的比例，主要目的在于使海藻糖在合适的时间内被洗脱。当甲醇水的比例为4∶1时，海藻糖在3 min左右出峰。见条件优化根据流动相的种类和比例，首先设漂移管温度为70℃，氮气气速为2. 0 L/ min.保持气速不变，改变漂移管温度，观察信号基线水平和噪音， 75℃时流动相基本挥发，噪音不是太大。固定漂移管温度为75℃，观察不同氮气流速时海藻糖的信号强度，为在较小噪音水平上，产生最大检测响应值的最低气速。故选定漂移管温度为75℃，氮2. 3线性关系考察将海藻糖贮备液稀释配成30， 50， 100， 300，500 mg/ L的系列浓度，依次进样20 LL，根据ELSD测得的峰面积对相应的标准溶液浓度进行线性回归，发现线性很差。以海藻糖浓度的对数对ELSD测得的峰面积的对数进行线性回归，两者间存在着良好的线性关系，结果与图2.将最小浓度的标准溶液再逐级稀释，依次进样20 LL，计算当信噪比为3时对应的标准溶液浓度以确定检出下限，得到的海藻糖检测下限为5 mg/ L.
2. 4海藻糖样品的测定对同一份样品，重复进样5次，用ELSD测定其峰面积，取5次测定平均值计算样品中海藻糖含海藻糖浓度峰面积浓度的对数值峰面积的对数值分析试验室量。在样品溶液中加入已知量的海藻糖标准溶液，测定其回收率，结果。
回收率（ ）2. 5讨论使用反相高效液相色谱法分离糖时，可以采用纯水做流动相。利用ELSD的操作使全部柱流出物都进入直的漂移管，让流动相在其中蒸发，为了有利于蒸发必须使用较高的操作温度。如果采用纯水做流动相，相应地， ELSD就必须采用较高的漂移管温度和较大的雾化器载气气速，使得ELSD检测的峰面积减小，降低了灵敏度。故本文采用沸点较低的甲醇为主作为流动相。
在使用当前的色谱条件时，当海藻糖浓度为30～1000 mg/ L范围内，其浓度与ELSD测得的峰面积线性关系很差，而将它们取对数后再进行拟合，则可得到良好的线性关系。采用同一台ELSD在正相条件下，检测天麻甙（对羟甲基苯BD吡喃葡萄糖甙） ，天麻甙浓度在21. 3～890 mg/ L范围内，其浓度与ELSD测得的峰面积线性关系很好，将它们取对数后再进行拟合，其线性关系不如前者（详情另报）。可见ELSD的响应值与被测物浓度的关系曲线比较复杂，这与许多文献的报道是一致的，其具体关系尚处于研究中。
RID是检测糖主要的检测器之一，但它对工作环境要求很苛刻，要求恒温，恒流速，且无法采用梯度洗脱，其检测灵敏度也不够高。ELSD的出现，在一定程度上弥补了传统检测器的不足，特别是对无紫外或紫外末端吸收的大分子有机化合物的检测，显示出其优越性。
采用高效液相色谱蒸发光散射检测验正海藻糖的纯度，方法可靠，灵敏度较高。ELSD检测过程中，无溶剂峰干扰，基线平稳。
分析试验室
