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南瓜多糖降血糖有效部位的提取分离及检测
作者:管理员    发布于:2014-12-27 08:46:45    文字:【】【】【
基金项目: 1998年度江西省中医药科研计划项目( 98A28)南瓜多糖降血糖有效部位的提取分离及检测熊学敏1,曹珏2,赵银鹰3,石扬1,康明( 1江西省中医药研究所,南昌330077 2江西医学院,南昌330006 3江西制药责任有限公司,南昌330006)[摘要]目的:对具有降血糖作用的南瓜多糖粗品进行提取、分离和纯度检测。方法:将葫芦科植物南瓜Cu A200柱分离,获得多糖粗品,冷冻干燥后得白色粉末多糖,对该南瓜多糖有效组分经纸层析分析和玻璃纤维纸电泳纯度检查。结果:纯度检查不多于3个紫红色斑点。结论:该南瓜多糖有效部位为相对单一组分。

  降血糖南瓜多糖有效部位纸层析玻璃纤维纸电泳南瓜为葫芦科植物南瓜Cucurbita moschata( Duch. ) Poiret的果实,富含多种氨基酸、多糖、维生素、蛋白质、淀粉及纤维素,是广大群众所喜爱的宁波除尘器保健食品。中医认为,南瓜具有补中、益气、敛肺的功能,其水提醇沉物(粗多糖类)对大鼠有明显的降血糖作用,配伍玉米须和马齿苋,对糖尿病有较好的效果,但至今对南瓜多糖有效部位的研究作者未见报道。本研究对南瓜多糖中的降糖有效部位进行了提取、分离、检测,初步研究结果报告如下。

  1仪器与试剂1. 1仪器数显电动搅拌器(郑州长征仪器厂) ,数显恒温水浴锅( HH 4型,常州国华电器有限公司) ,离心机(北京医疗设备仪器厂) ,打浆机(荣事达电器有限公司) ,电泳仪(上海分析仪器厂)。

  1. 2试剂试验所用试剂均为分析纯。

  2南瓜多糖降糖组分的提取和分离2. 1南瓜多糖粗品的提取取新鲜成熟的南瓜,去液漂洗,30min后取出冲洗干净,置于打浆机中打浆,分别添加6倍, 5倍, 5倍重量的蒸馏水在75 80 e水浴上搅拌提取3次,时间分别为6, 4和4h,过滤。将滤盐酸调整pH为3. 0 3. 2后立即离药用炭加热脱色后过滤,脱色液置透析袋中用蒸馏水MPa)再经95乙醇沉淀2次,沉淀用丙酮、乙醚脱水,真空干燥后得到类白色南瓜多糖粗粉末。

  2. 2南瓜多糖降糖组分的分离、纯化将上述南瓜多糖粗品溶于0. 1 molL的氯化钠溶液中(尽可能达饱和状态) ,在5 8 e冰箱中冷置12h后离心,弃去沉淀,在滤液中加入40的三氯乙酸使之达到8的浓度,再在5 8 e冰箱中冷置12h后离心,沉氯化钠溶液溶解后经Sepharose氯化钠溶液洗脱、分离,用硫酸苯酚跟踪检测。收集含多糖组分(收率NaOH中和至pH6. 5 7. 0后,将上述洗脱液适当浓缩、蒸馏水透析,再用Sephadex A200柱层析分离、纯化,用0. 1氯化钠溶液洗脱(洗脱液流速: 0. 67 mL) ,收集该洗脱液的糖样,减压浓缩,冷冻干燥得白色粉末状南瓜多糖的降糖(精品)组分。

  3南瓜多糖降糖有效部位的纯度鉴定3.1纸层析分析取新华中速层析纸剪制成2cm 20cm规格,参照中华人民共和国药典2000版薄层色谱分析上样量分别为5, 10和20Lg,上行展开。

  展开剂分别为氯仿甲醇5醋酸( 8B2B0. 5)和正丁对湿度42.晾干后以硫酸苯酚试液喷板显示不多于3个紫红色的斑点。

  3. 2玻璃纤维纸电泳纯度检查取Waterman GF/ C玻璃纤维纸剪切成2cm 20cm规格,样品点在1cm 10cm玻璃纤维纸条上,然后将此样品纸条紧贴在基线处,使样品下渗至电泳纸条上,移去样品条,进行电泳(电压= 400V,时间为20min,缓冲剂为硼酸缓冲液, pH 9. 3)。取出纸条,自然晾干,喷对氨基苯甲醚硫酸盐显色烤15min,显示不多于3个紫红色的斑点。

  4讨论南瓜多糖降血糖的作用机制尚待深入研究,理论上认为,摄入蛋白质和氨基酸可刺激胰岛素分泌,提示南瓜多糖有可能是以糖蛋白的形式存在,并含有丰富的多种氨基酸可刺激胰岛素分泌产生降糖效果。

  本实验中所采用的提取方法收率高、纯度也较高,南瓜多糖属酸性杂多糖,根据杂多糖的电离性质,本实验选用先经Sepharose CL4B柱层析,用0. 1氯化钠溶液洗脱、分离后再经Sephadex A 200柱层析分离、纯化,并用薄层色谱和电泳的方法对南瓜多糖进行了纯度鉴定,证明为相对同一组分,该组分经动物药效学实验证明具有明显的降糖效果[作者简介]熊学敏( 1957 ) ,男,副主任药师。主要研究熊学敏,叶士玲,许春波,等。南瓜多糖对四氧嘧啶糖尿病大鼠石扬,熊学敏,刘丹,等。降糖宁治II型糖尿病68例临床观察熊学敏,石扬,康明,等。复方降糖宁颗粒剂的质量标准研究孔庆胜,蒋滢,南瓜多糖的组成及摩尔比测定[ J] .中国现代应石扬,熊学敏,康明,等。复方降糖宁颗粒剂降糖疗效的评价熊学敏,石扬,康明,等。南瓜多糖降糖有效部位的提取分离及5天津药学6杂志由天津市医药集团有限公司主管,天津市医药集团技术发展有限公司和天津市药学会主办的药学领域综合性刊物。国内统一刊号CN12 1230/ R,国际标准刊号ISSN1006 5687.本刊为双月刊,每双月末出版,定价年48. 00元,收款单位:天津药学杂志社,开户银行:天津市工商银行成都道分理处,账号: 0302010509307764.地址:天津市和平区新华南路庆云里21号,邮编: 300050,电话: ( 022) 23348.

  5华西药学杂志6是由华西医科大学药学院,中国药学会四川分会联合主办的药学综合性学术刊物。国内外公开发行,统元,全年定价48. 00元,邮发代号5解放军药学学报6为国家级药学学术性期刊,由中国人民解放军总后勤部卫生部主管,总后勤部卫生部药品仪器检验所主办、出版,向国内、外公开发行,国内统一刊号CN11 4227/ R,国际标准刊号ISSN 1008 9926,邮发代号双月刊,大16开本, 64页,每期定价9. 00元,全年54. 00元。编辑部地址:北京市丰台西路17号,邮编:5当代医学6杂志是由卫生部主管、新彬国际医学信息公司承办的一本面向中高级医务工作者的综合性医学期刊杂志,以我国医学学术权威撰写的综述文章为主,系统、全面的报道目前国内外最新的医学技术及研究热点。本刊为月刊,全年12期,全年120元。邮发代号: 82 829,杂志社地址:北京丰台区方庄芳城园1区3号楼金都公寓1层,邮编: 100078,5广东药学6是由广东省药品监督管理局主管、中国药学会广东分会主办的药学学术性期刊,国内外公开发行。邮发代号: 46 170,各地邮局均可订阅。本刊为双月刊(双月25日出版) ,大16开本, 56页,定价6. 00元,全年共36. 00元。编辑部含传真)。

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